離心機是蛋白質表達的通關設備之一


　　離心機是蛋白質表達不可或缺的。俗話說，細節決定成敗，尤其是在蛋白質表達和純化等復雜實驗中。操作中的一個小錯誤可能會直接影響結果。


　　雖然大致可以分為表達、分離和純化三個步驟，但這個過程復雜。


　　蛋白質表達前期有一系列復雜的過程，需要很長時間，不能放松警惕。


　　蛋白質純化是通關的重要一步。選擇合適的純化方法可以提高蛋白質純化的效率，使蛋白質純化簡單方便。常用的方法有親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、疏水層析等。


　　親和層析


　　親和層析純化是一種蛋白質純化技術，它利用生物大分子與相應分子特異性的可逆結合。


　　離子交換層析


　　離子交換色譜是根據蛋白質表面的電荷數量進行蛋白質分離和純化的技術。


　　凝膠過濾色譜法


　　凝膠過濾(也稱為排阻色譜或分子篩)是一種根據分子大小從混合物中分離蛋白質的方法。


　　疏水相互作用色譜


　　疏水作用色譜是利用鹽水體系中樣品分子的疏水基團與色譜介質的疏水配體之間疏水力的差異進行分離的色譜方法。


　　雖然有各種方法，但都需要用離心機分離純化。


　　以脂肪氧合酶重組蛋白的誘導為例:


　　1.將含有重組脂肪氧合酶蛋白的大腸桿菌BL21菌株接種在5 mL LB液體培養基(含100微克/毫升氨芐青霉素)中，并在37℃下培養過夜。


　　2.按照1:50或1:100的比例稀釋過夜****。一般將1毫升過夜培養物轉移到100毫升LB液體培養基(含100微克/毫升氨芐青霉素)中，在37℃振蕩培養至OD600=0.6-0.8(優選0.6，約需3小時)。取10微升樣品進行SDS-PAGE分析。


　　3.對照組不添加誘導劑，實驗組添加IPTG到濃度為0.5 mmol/l，在37℃下繼續培養1-3小時。


　　4.以12000轉/分鐘離心10分鐘，棄去上清液，將****存放在-20℃或-70℃的冰箱中。